光学显微摄影即显微摄影电子显微摄影而用的术语。由物镜(倍率2-100倍)和目镜(5-15倍)的组合，若用35毫米照相机，可在胶片上拍成5-800倍。若为六寸片，能拍出20-3000倍的照片，但光学显微镜倍率限度约为1200倍。若超出此限度进行扩印，无法获得清晰的像。光学显微摄影必须要有明亮、均匀、无反光的照明，同时要注意光源的调节和色温的变化。 另外，由于样品的性能差异，还要选用不同的照明方法。下面是小编为您整理的关于光学显微摄影的用光方法与技巧，希望对您有所帮助!

光学显微摄影的用光方法与技巧一、光学显微摄影的用光

光学显微摄影的照明，会对物镜解像力产生明显影响，一般要求光源的输出能够集中到很小面积上，光强高、热量小，几何尺寸不大。

在一般明视场照明显微摄影时，通常采用6伏或者12伏螺口形白炽钨丝灯泡做照明光源，色温为2700～3200K，其亮度的调整由变压器实现，这种照明尽管看上去很亮，色温并不高，所以，应尽量用最高电压，使灯光亮度、色温提高，并使用RAW格式拍摄，以便后期校正色温。

但是，白炽钨丝灯泡长期使用，其钨丝蒸发后所产生的沉物会积聚在玻璃罩内壁，这样会降低亮度与色温。所以，12伏100瓦的卤素钨丝灯光便成了光学显微摄影的优质光源。(这种卤素钨丝灯在灯管内充卤素气体，在灯丝点燃后，蒸发出来的钨会与卤素气体形成卤化钨，附着在灯管内壁，而关闭电源冷却时，卤化钨又会分解，届时钨又回到灯丝上去，这样便延长了灯泡的使用寿命 ，改善了光源照明，缩小了灯泡的几何尺寸，提高了光源强度)。

用于光学显微摄影的光源还有氙灯、锆灯、电子闪光灯、汞蒸气灯等，可以根据不同的目的，选用适当的光源。如氙灯不仅可以发出连续的可见光，还包含长波紫外线和红外光谱部分;汞蒸气是优质的单色光源，特别适于单色黑白显微摄影。

拍摄显微照片，要求有明亮、均匀、无反光的照明条件，其照明方法可分为两类，即透射照明和反射照明(落射光照明)

透射光照明是指从光源射出的光线从标本的下面透过标本进入物镜。而落射照明是指光线从正面投射到标本的正面，物镜接受的光是从标本反射来的光。

落射光照明主要用于拍摄不透明的标本，如皮肤、小生物、植物果实表面等。拍出的像有立体感。落射光与物镜之间的角度越小越好，现代显微摄影装置的落射光大多与物镜合轴。 在没有专业设备的情况下可以用斜射照明，在对应面加反光屏，或用另一只灯做辅助光，也可以使用环形闪光灯。

光学显微摄影的用光方法与技巧二、光学显微摄影的曝光控制

虽然现在的相机均有自动测光或自动曝光功能，但是如果一个视野中亮处面积超过二分之一，则易出现曝光不足的现象，所以如果标本主体小，又处在亮背景中，就要适当增加曝光时间。

在控制曝光时，要注意以下因素：

1. 光源强度的影响： 由于电压的变化，光源亮度可能产生5-10倍的变化。

2. 光源的距离及对标本的照射面积。

3. 光源的波长及色温。 光源的波长长、色温低，色光偏红时，曝光时间要长些。光波短，色温高，色光偏青时，曝光时间要短些。

4. 电压的波动会引起曝光量的改变，所以摄制过程中要保持电压的相对稳定。

5. 聚光器的位置经过实验固定后不宜改动。

6. 使用滤色镜、乳白玻璃、偏振镜等都要按其曝光指数增加曝光时间(手动曝光)。

7. 目镜的放大倍率。 以×5倍的目镜作曝光基准1时，×10倍目镜要4倍的曝光量，×15倍目镜要增至9倍的曝光。

8. 物镜的倍率和N·A值： 如果把×10倍的目镜作为1时，×40倍目镜要2.5倍的曝光，×100倍的物镜要4倍的曝光。

9. 从目镜出射点到感光片的距离

10. 标本的染色也会对曝光产生影响

11. 标本与目镜间的介质折射率大、曝光时间短，反之，曝光时间长。曝光时间与折射率成反比。

12.聚光镜的光阑孔径变化能使曝光产生2～20倍的变化。

光学显微摄影的用光方法与技巧三、光学显微摄影中滤色镜的应用

滤色片几乎在拍摄什么样的标本都有用场。例如：

1. 用滤色片校正反差突出重点光学显微摄影往往要突出重点，这就要使用适当的滤色镜加强反差，强调需要突出的重点结构 ，而减弱其非重点部分。使用标本染色补色的滤色镜可以增强标本反差，比如苏木精染出的色标本中用绿滤色镜，就可增强反差。

2. 两种颜色的结构体现： 如果想使标本中两种以上的颜色都清楚地呈现在画面上，如红、蓝两种颜色，可以采取两次曝光的方法，先用红滤色镜，再用蓝滤色镜各曝一次光，就可以清楚地体现两种颜色的结构 。

3. 短波光滤色镜可以提高对标本的分辨率。 短波光滤色镜(如UV镜)可以分辨出在可见光下肉眼看不见的组织结构。用紫外线滤色片配合紫外胶片可提高成像可分辨，达到560～1000线/毫米。 紫外线光源的射线很热，采用一般滤色片容易烤焦标本，所以要用液体滤光器，其内装有氯化铜或硫酸铜溶液30克/升。这不仅可以防热、吸收红外线尚可让紫外线通过。